Wie homogenisiere ich C. elegans am Besten?

Liebe Experten!

Ich möchte meine Nematoden (C. elegans) homogenisieren, um das Level an Lipidperoxidation und in einem anderen Assay Antioxidantien (die relative, antioxidative Kapazität innerhalb der Nematoden) zu bestimmen. Wir haben in unserem Labor eine Speed Mill, die mechanisch mit Hilfe kleiner Perlen die Körper aufschließt. Aber benötige ich zusätzlich irgendwelche Puffer, z.B. Lysis-Puffer oder geht das auch ohne? Und wenn es ohne geht, nehme ich dann als Lösung M9-Puffer, NaCl oder etwas ganz anderes?
Bin gerade ziemlich überfragt weil ich überall andere Protokolle finde…
Vielen Dank für die Hilfe!!!

Nadine

Hallo Nadine,

Für gewöhnlich homogenisiere ich nur Zebrafischembryonen :-/

Die Tatsache, dass du verschiedene Protokolle findest, sollte dich nicht abschrecken! Es kann ja durchaus sein, dass verschiedene Protokolle gleichermaßen gut funktionieren. Versuche halt nach Möglichkeit, dich an einem Protokoll zu orientieren, das möglichst nahe an deinem Versuch ist. Zudem könntest du auch noch mal in dem Kit (falls du einen Kit verwendest) des Herstellers schauen, ob dort bestimmte Chemikalien im Puffer ausgeschlossen werden.

Weiterhin könntest du auch zwei verschiedene Protokolle parallel testen und schauen, ob du zu ähnlichen Resultaten kommst. Als Reviewer würde mich das eher mehr überzeugen, als würdest du nur gefühlt willkürlich nach einem Protokoll vorgegangen sein - man könnte ja nicht ausschließen, dass deine Beobachtung ein Artefakt bedingt durch die Homogenisierung ist. Zur Orientierung hilft dir im Übrigen vielleicht auch ein Protokoll zum selben Thema, bei dem ein anderer Organismus (mit ähnlichen Eigenschaften bez. der Homogenisierung) verwendet wurde.

Wobei das größte Risiko natürlich ist, dass du Unterschiede in den Ausgangsproben durch Homogenisierungen auslöschst, in dem du die nachzuweisenden Metabolite oxidierst. Also schau halt auch, ob in deinem Puffer irgendwelche Substanzen sind, die potentielle Oxidantien sind.

Sorry, dass ich nicht konkreter helfen kann. Wünsche dir dennoch den nötigen Mut und den verdienten Erfolg

Grüße!

Theo Doric

Hallo Nadine,

ginge es nur um ein Proteinlysat, würde ich sagen, du brauchst Lysepuffer. Mit deinen Essays kenne ich mich aber nicht aus.
Tut mir leid.

Beste Grüße

Marcus Wirth

Ich wuerde auf alle Faelle noch einen Lysisbuffer dazunehmen. Ich selbst benutze neben dem Homogenizer noch Lysisbuffer um an Protein zu gelangen, also sollte es bei dir auch funktionieren. Nur den Homogenizer kann ich nicht beurteilen, meines Erachtens bekommt man dadurch aber mehr eine single cell suspension und keinen 100%igen Aufschluss der Zellen. Kann mich aber auch irren.

leider keine Ahnung, sorry

Hallo Nadine,

sorry, habe niemals mit C. elegans gearbeitet.

Viel Erfolg bei Deinen Recherchen!

litterae